OLIGO ANTISENSE

Os oligonucleotídeos antisense representam uma excelente ferramenta para inibir os níveis de expressão gênica tanto in vitro quanto in vivo. Sua descoberta introduziu uma nova abordagem para o desenvolvimento de drogas terapêuticas, uma vez que as drogas antisense são projetadas para inibir a produção de proteínas causadoras de doenças. Isso oferece o potencial para desenvolver drogas altamente seletivas e menos tóxicas.

A modificação de oligonucleotídeos antisense, seja como DNA ou RNA sintético, é a chave para prevenir sua degradação baseada em nuclease em células e para aumentar sua afinidade para mRNAs alvo específicos. Fosforotioato (S-oligos / PTO) é o produto químico resistente a nuclease mais usado e mais simples disponível para aplicações antisense. Consiste em um átomo de enxofre que substitui um oxigênio sem ponte na estrutura do oligo fosfato.

Em altas concentrações, os fosforotioatos podem causar toxicidade ou outros artefatos, devido à sua maior ligação não específica às proteínas, em comparação com os oligos fosfodiéster não modificados. Esses problemas podem ser resolvidos, em parte ou completamente, usando designs quiméricos.

Metabion oferece:

• Phosphorothioate (PTOs)/phosphodiester chimera: normalmente tem um núcleo central de DNA não modificado e uma a quatro ligações internucleosídicas modificadas por S nas extremidades 5 ‘e 3’. Pelo menos 3 ligações PTO nas extremidades 5 ‘e 3’ de um oligonucleotídeo são geralmente recomendadas para prevenir a degradação por exonucleases. Adicionar ligações PTO no núcleo central de seu oligonucleotídeo (assim fazendo um oligonucleotídeo full-PTO) irá prevenir adicionalmente a degradação relacionada a endonucleases. No entanto, isso também pode levar a efeitos de citotoxicidade.
• DNA/ 2′-O-Methyl RNA chimera: a presença de 2′-O-Metil RNA aumenta tanto a afinidade do oligo antisense para o mRNA alvo (aumentando a Tm), e sua resistência à nuclease. No entanto, as bases 2′-O-Metil RNA não ativam a clivagem da RNase H, o que pode comprometer a ação do oligo antisense. Portanto, os projetos preferidos incorporam RNA modificado por 2′-O em oligos anti-sentido quiméricos que retêm um domínio de ativação de RNase H de DNA (ou DNA de fosforotioato).
• Replacement of dC with 5-Methyl-dC, que é particularmente útil no contexto dos CpG, uma vez que o 5-Metil dC reduz as respostas imunes adversas in vivo, juntamente com o aumento moderado da Tm.

Uma alternativa ao DNA antisense é a interferência de RNA (RNAi). Para solicitar o siRNA, preencha os dados no final da página com as informações da sua sequência que enviaremos a proposta em breve!!

A Metabion recomenda que todos os oligos antisense passem por purificação por HPLC e que os oligos sejam submetidos a uma troca de sal de Na + antes do uso em células ou animais vivos para garantir que os sais usados ​​na purificação sejam removidos. Desta forma, os oligos antisense da Metabion estarão prontos para uso em aplicações in vivo.

Estamos muito felizes em oferecer aos nossos clientes Fosforotioatos (PTO), 2’O-Metil RNA e 5-Me-dC como modificações para oligonucleotídeos de DNA. Para escala de síntese e rendimento final, consulte a tabela abaixo. Para escalas de síntese maiores, gentileza solicitar.

Para minimizar os problemas de citotoxicidade, recomendamos o uso de nosso serviço de purificação de cartuchos SEC, que deve ser um serviço complementar.